久久精品国产精品国产精品污,11孩岁女精品A片BBB,亚洲国产精品无码久久一区二区,FREE性丰满白嫩白嫩的HD

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > 細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):885 更新時(shí)間:2023-03-24
  一、怎樣凍存動(dòng)物細(xì)胞?
 
  一個(gè)實(shí)驗(yàn)室得到一個(gè)新的細(xì)胞株后,首先要把該細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增后凍存起來(lái)。細(xì)胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細(xì)胞時(shí)有備份可用,另外幾乎所有細(xì)胞在培養(yǎng)傳代的過(guò)程中發(fā)生一定程度的變異,為了保持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致,一般細(xì)胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了,需要將凍存的,傳代較少的細(xì)胞化凍培養(yǎng)再使用。細(xì)胞冷凍過(guò)程有四個(gè)要點(diǎn):細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲(chǔ)存環(huán)境。
 
  1.細(xì)胞的收獲
 
  用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
 
  2.保護(hù)劑的使用
 
  細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
 
  3.細(xì)胞凍存的速率
 
  細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
 
  4.儲(chǔ)存環(huán)境
 
  細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
 
  二、怎樣化凍動(dòng)物細(xì)胞?
 
  1.化凍過(guò)程的原則是要讓凍存的細(xì)胞快速融化。
 
  2.如果細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮液面下,使用者最好準(zhǔn)備好必要的防護(hù)器具(至少要戴上護(hù)目鏡,最好戴上面罩和較厚的手套),防止進(jìn)入凍存管的液氮驟然膨脹引起爆炸而造成傷害。從冰箱或液氮罐取出細(xì)胞后將凍存管放37℃水浴輕輕晃動(dòng)使之化凍完全,注意不要讓水浸到蓋子以防污染發(fā)生。
 
  3.由于大多防凍劑與細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間接觸時(shí)對(duì)細(xì)胞有毒害,所以最好盡快除去細(xì)胞凍存時(shí)加入的防凍劑。
 
  4.防凍劑的去除方式和細(xì)胞的敏感性有關(guān)。有些細(xì)胞在某些防凍劑存在的條件下能很好的貼壁生長(zhǎng),可以直接將化凍的凍存細(xì)胞連同其凍存液加入預(yù)備好15-20ml培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜后換培養(yǎng)液。
 
  5.對(duì)于敏感細(xì)胞要加入 10ml 培養(yǎng)液中, 100xg 離心 5 分,去上清后加培養(yǎng)液輕輕重懸細(xì)胞,加入培養(yǎng)器皿后在培養(yǎng)箱培養(yǎng),第二天更換培養(yǎng)液。
脱了内裤猛烈进入A片视频免费| 午夜欧美理论电影无码苦月亮| 中文无码亚洲一区二区蜜桃| 乱VODAFONEWIFI熟妇| 两根硕大一起挤进小紧H共妻| 亚洲AV无码乱码在线观看,不卡| 国产高清在线A视频大全| 99久久人妻无码精品系列| 波多野结衣在线视频| 亚洲熟妇色XXXXX欧美老妇Y| 久久久精品人妻无码专区不卡| 朝鲜肥女BBBWBBBWBBB| 无翼鸟邪恶漫画| 中文精品久久久久国产网址| 成人国产片女人爽到高潮网站| 人妻出轨系列38部分阅读| 亚洲国产天堂久久综合| 精品国产乱码久久久久久1区2区| 小雪第一次交换又粗又大老杨| 俄罗斯处破女A片出血| 羞羞漫画网页入口| 性生交大片免费看| 亚洲国产精品一区二区WWW| 人与性动交AAAABBBB| 亚洲综合无码一区二区三区| 免费真人视频网站直播下载| 日日天干夜夜狠狠爱| 极品少妇高潮啪啪AV无码| 五月天激情国产综合婷婷婷| 日韩免费无码一区二区视频| 处破学生毛都没长齐在线播放| 亚洲一区二区三区女厕偷拍| 久久久国产精品免费A片分环卫| 人妻无码AⅤ不卡中文字幕| 老校长不戴套玩新婚老师| 强开小娟嫩苞又嫩又紧视频播放| 国产精品亚洲一区二区无码| 久久婷婷五月综合色国产香蕉| 天天爱天天做天天爽| 99久久国产露脸国语对白| 国产精品无码V在线观看|